O ELISA (ensaio imunossorvente ligado a enzimas) é um ensaio de bioquímica analítica amplamente utilizado que utiliza anticorpos e alteração de cor para detectar a presença e a quantidade de um antígeno alvo em uma amostra. Os agentes de bloqueio desempenham um papel crucial na ELISA, pois ajudam a reduzir a ligação não específica, o que pode levar a resultados falsos positivos e dados imprecisos. Como fornecedor de ELISA, muitas vezes me perguntam sobre os agentes de bloqueio comumente usados em Elisa. Neste blog, apresentarei alguns dos agentes de bloqueio mais usados e suas características.
1. Álbumina sérica bovina (BSA)
A albumina sérica bovina é um dos agentes de bloqueio mais populares de Elisa. É uma proteína grande e globular que é relativamente barata e prontamente disponível. A BSA trabalha ligando -se aos restantes locais desocupados na superfície da microplaca depois que o antígeno ou anticorpo foi imobilizado. Isso impede outras proteínas na amostra ou reagentes de detecção de se ligarem não - especificamente à placa.
A BSA é compatível com uma ampla gama de sistemas de detecção, incluindo anticorpos enzimáticos - conjugados e fluorescentes - marcados. Pode ser usado em vários tipos de ELISA, como ELISA direta, indireta, sanduíche e competitiva. Uma concentração típica de BSA usada para bloqueio está entre 1% e 5% em uma solução tampão, como solução salina tamponada com fosfato (PBS).
No entanto, a BSA tem algumas limitações. Algumas amostras podem conter anticorpos contra a BSA, o que pode levar a resultados falsos positivos. Além disso, em alguns casos, a BSA pode interferir na ligação do antígeno alvo ao anticorpo, especialmente se o antígeno tiver uma alta afinidade pelo BSA.
2. Leite não -gordo seco
O leite não -gordo é outro agente de bloqueio comumente usado. É uma alternativa eficaz para a BSA e é rica em caseína e outras proteínas. As proteínas no leite não -gordo não podem bloquear efetivamente os locais de ligação não específicos na microplaca.
O leite não -gordo é frequentemente usado em uma concentração de 2% - 5% em uma solução tampão. É adequado para muitas aplicações ELISA, mas não é recomendado para uso com ensaios de detecção de fosfoproteínas porque as proteínas do leite contêm fosfatos, o que pode interferir na detecção de proteínas fosforiladas.
Uma das vantagens do leite não -gordo é que ele pode melhorar a relação sinal - para o ruído em alguns ensaios ELISA. No entanto, pode conter proteases que podem degradar os anticorpos ou antígenos no ensaio, especialmente se a etapa de bloqueio for realizada por um longo período à temperatura ambiente.
3. Gelatina
A gelatina é uma proteína derivada do colágeno. É um bom agente de bloqueio porque forma uma camada fina na superfície da microplaca, que pode impedir a ligação não específica. A gelatina é frequentemente usada em uma concentração de 0,1% - 1% em uma solução tampão.
A gelatina é compatível com muitos sistemas de detecção e pode ser usada em diferentes tipos de ELISA. É particularmente útil em ensaios em que a amostra contém uma alta concentração de proteínas, pois pode reduzir o ruído de fundo causado por interações proteicas não específicas.
No entanto, a gelatina pode não ser tão eficaz quanto a BSA ou o leite não -gordo em alguns casos, especialmente quando a microplaca tem uma alta capacidade de ligação. Além disso, as soluções de gelatina precisam ser preparadas frescas, pois podem apoiar o crescimento de microorganismos ao longo do tempo.
4. Casein
A caseína é a principal proteína no leite. Pode ser usado como um agente de bloqueio na forma de caseína pura ou como parte do leite não -gordo. A caseína possui uma alta afinidade pela superfície da microplaca e pode efetivamente bloquear locais de ligação não específicos.
A caseína é frequentemente usada em uma concentração de 1% - 2% em uma solução tampão. É adequado para muitas aplicações ELISA, mas, como o leite não -gordo, não é recomendado para ensaios de detecção de fosfoproteínas. A caseína pode fornecer um bom equilíbrio entre bloquear a eficiência e a eficácia do custo.
5. Bloqueadores de bloqueio
Também existem buffers de bloqueio disponíveis no mercado que são formulados especificamente para ELISA. Esses buffers geralmente contêm uma combinação de diferentes agentes de bloqueio, como BSA, caseína e outros aditivos, para fornecer desempenho ideal de bloqueio.
Os buffers de bloqueio disponíveis no mercado são convenientes de usar, pois são pré -formulados e prontos para uso. Eles podem economizar tempo e esforço em laboratório. Alguns buffers de bloqueio também são projetados para serem compatíveis com sistemas de detecção específicos ou tipos de ELISA.
Ao escolher um agente de bloqueio, vários fatores precisam ser considerados. Isso inclui o tipo de ELISA, a natureza da amostra, o sistema de detecção e o custo. Muitas vezes, é necessário otimizar a etapa de bloqueio testando diferentes agentes e concentrações de bloqueio para alcançar os melhores resultados.
Além de usar o agente de bloqueio apropriado, a qualidade do equipamento utilizado no ELISA também afeta os resultados do ensaio. Por exemplo, umAuto ELISA Processorpode automatizar o processo ELISA, reduzindo o erro humano e melhorando a reprodutibilidade do ensaio. UMThermo Microplate Shakerpode garantir uma mistura uniforme dos reagentes, o que é crucial para obter resultados precisos. E umLeitor de microplacas ELISAé usado para medir a absorvância ou fluorescência das amostras, fornecendo dados quantitativos para o ensaio.
Como fornecedor da ELISA, oferecemos uma ampla gama de agentes de bloqueio de alta qualidade, bem como o equipamento necessário para o ELISA. Nossos produtos são projetados para atender às necessidades de diferentes laboratórios e projetos de pesquisa. Se você estiver interessado em comprar nossos produtos ELISA ou tiver alguma dúvida sobre o ELISA, não hesite em entrar em contato conosco para compras e negociação. Temos o compromisso de fornecer os melhores produtos e serviços para apoiar sua pesquisa.
Referências
- Harlow, E., & Lane, D. (1988). Anticorpos: um manual de laboratório. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
- Voller, A., Bidwell, De, & Bartlett, A. (1979). O ensaio imunossorvente ligado à enzima (ELISA). Dynatech Laboratories.
- Crowther, JR (2001). O guia ELISA. Humana Press.